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做實驗的時候才發現細胞的種類太多,於是我們需要查詢各種文獻看每個細胞的特征,從而設計實驗規劃與步鄹(zōu),我們在緊湊的(de)實驗種完美了實驗(yàn),提交文章的時候,才發(fā)現,需要細胞鑒定。
據統(tǒng)計約30%細胞係被交叉汙(wū)染或錯誤辨識,因使用了交叉汙染或錯誤辨識的細胞而導致研究結論錯誤(wù)、結果不可重複、臨床細胞治療災難(nán)性後果……這浪費大量時間、精力(lì)和金錢。因此NIH、ATCC等權(quán)威機構多次發出呼籲(yù),要求研究者(zhě)對細胞進行鑒定,最近美媒報道1/6科學家在研究使用(yòng)“假冒”細(xì)胞(bāo),2014年12月(yuè)、2015年2月Science雜(zá)誌(zhì)分別發表文章專題闡述細胞交叉(chā)汙染和錯誤(wù)辨識(shí)的嚴重性;2015年4月Nature通知:Nature旗下所有雜誌將要(yào)求作者鑒定論(lùn)文(wén)中所用細胞係;2015年6月即有報道稱一科學家因用錯細(xì)胞(bāo)係,撤銷Nature論文。NIH、ATCC、Nature和Science等機(jī)構對此多次發出(chū)呼籲,要求研究(jiū)者對細胞進(jìn)行鑒定,STR基因分型已被作為金標準應用於細胞係(xì)鑒定,越來越多雜誌開始要求投(tóu)稿人提供細胞STR鑒定結果。
在2011年美(měi)國就已(yǐ)經頒布了細胞STR鑒定國家標準(ANSI/ATCC ASN-0002-2011)。目前STR檢測已被廣泛應用於(yú)親子鑒定、個(gè)體識別、細胞來源判定等方麵。ATCC、DSMZ、JCRB等國際知名細胞庫已將STR基因分(fèn)型(xíng)列為(wéi)細胞鑒定的金標準。
STR鑒定已經成為了細胞(bāo)株的“身份證”能(néng)在科研界(jiè)通行(háng)無阻,必須要有STR。那麽動物源呢,因(yīn)為(wéi)建(jiàn)立的DNA條帶並(bìng)不完善,目(mù)前(qián)隻(zhī)有小鼠的部分細胞可以提供STR。
STR鑒定描述:
利用熒光標記擴(kuò)增產物(wù)長度多態分析方法(fǎ)對細胞樣本進行9個/16個STR位點進行分型。設計PCR引(yǐn)物,組(zǔ)成2個PANEL用(yòng)於擴增多(duō)態位點。位點(diǎn)的熒(yíng)光標記采(cǎi)用引物上標記5’FAM熒光標記(jì)。引物用在線Primer3 軟件設計(http://frodo.wi.mit.edu/cgi-bin/primer3/primer3_www.cgi)。PCR產物稀釋(shì)後取少量與內標標記混勻後直(zhí)接上ABI 3130xl進行毛細管(guǎn)電泳,數據文(wén)件用GeneMapper4.0(Appliedbiosesystems)來分析。
STR(Short Tandem Repeat,短串聯重複序列(liè))是一類廣泛存在於真核生物基因組中的DNA串聯重複序列,由於其核心序列重複次(cì)數存(cún)在(zài)個體差異多態性,因此(cǐ)STR也被稱為細胞的DNA指紋。