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適用於多(duō)種生物工藝流程(chéng)的全自動管式離心機(jī)

發布時間(jiān):2021-03-19      點擊次數:782

離心過(guò)濾技術在生物工業,細胞初級提取和細胞(bāo)溶解物淨化處理上無所不在(zài)。這種技術特別是在處理高分子如疫苗,類病毒顆粒或結構鬆散的多糖分子及核酸上,較微細過濾法有更大的優(yōu)勢。

管式離心機、碟(dié)片式離心機和螺旋式沉降離(lí)心機作為(wéi)離心過濾設備,在淨化生物(wù)製(zhì)品上的應用是非常普遍的。選擇使用哪一種離(lí)心機來處理,主要是看物料的本性(xìng)、固體顆粒的濃度(dù)和(hé)沉降能力。舉例來說,由於沉降能力低,螺旋式沉降(jiàng)離(lí)心機(jī)隻能處理大顆粒的物料,如菌絲體或絮凝細胞。

碟(dié)片式離心機在生物過程處理中有(yǒu)很(hěn)寬(kuān)廣的適用性,它已經長(zhǎng)期運用在微生物細胞和內含體的回收,細胞溶菌液的淨化。它(tā)有一個(gè)相對新的應用領域是在哺乳細胞中(zhōng)的回收。如治(zhì)療蛋白在(zài)哺乳細胞中是具有很低的壓榨率(2g/L),因此在生產上一次通常要處理大(dà)於15,000L的量。碟片式離心機的高生產能力,在這(zhè)方麵的應用(yòng)是一個很(hěn)好的選擇。但是,哺乳細胞(bāo)對剪切力是非常敏感(gǎn)的,這種機器進料口會產生高剪切力,同(tóng)時為了防止過高(gāo)的(de)流動應力,離心機通常的工作轉速通常低於最高轉速(sù)。碟片式離心機能處理(lǐ)大(dà)量的物料,但是排出的沉降物是(shì)濕泥狀的。這種濕泥是持(chí)續或(huò)間歇性的被噴(pēn)出,這製約了它(tā)對高密度細胞溶解液的回收,高潔淨沉積產品溶液的(de)下遊分離。

管式離心機在(zài)這些方麵的(de)處理卻很有效。首(shǒu)先它的分離因素比(bǐ)碟片式離心機更高,所以(yǐ)澄清液(yè)更清,固相更幹燥,固相幹燥率可達40%;其次轉鼓(gǔ)內(nèi)部沒有(yǒu)複雜的碟(dié)片,剪(jiǎn)切力很小,同時產生更低(dī)的液體(tǐ)霧沫(mò)量。但是管式離心(xīn)機需要間歇性停機卸料,所以它的處理量不大。選擇哪一種離心機還要考慮(lǜ)到生物處理中需要(yào)的一些重要功能:如在位清洗(C.I.P),在位(wèi)消(xiāo)毒(dú)(S.I.P)功能。

生物技術公司在臨床追蹤潔淨(jìng)治療,為了市場必須(xū)快速轉變新的方向。在這過程中的一個關鍵要素是小型設備在其中起的雙重(chóng)作(zuò)用:為臨床尋找GMP適應材料和為大批量生產起工藝示範作用(yòng)。隨著從宿主(zhǔ)細胞中提取的生物製劑種類不斷(duàn)增加,工業上需要多用途的,可升級的機(jī)器來為臨(lín)床研究處(chù)理藥品(pǐn)。隻要離心分離符合這些需求,毫無疑問普遍都能獲(huò)利。然(rán)而,選擇一款合適的離心設備是(shì)不易(yì)的。

                   傳統管式離心機手動卸料(liào)過程                STC自動卸料過程


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這款離心機對於幹燥泥餅是半連續性的(de)出料,同時擁有CIPSIP和(hé)全密封功能。它有低剪切力的噴嘴(zuǐ)進料,高效的活(huó)塞機構直接出料的設計,這種設(shè)計提供(gòng)了一個內部無隔板,窄型的轉(zhuǎn)鼓結構(gòu)。另外向上流動的模式(shì),低剪切力進料錐形腔,結合下(xià)溢式排水(shuǐ)促進更強的浸注性,同時擁(yōng)有一個穩定的,高(gāo)壓的液(yè)體層麵,使分(fèn)離效果達到最佳。

我們評定STC-5的淨化(huà)能力通過處理(lǐ)以下多種物(wù)料:完整細胞和酵母溶解物(wù),革蘭氏陽性的和陰性的微生物溶解物,及中國倉鼠卵巢的哺乳(rǔ)細胞。我們用哺(bǔ)乳細胞溶解物(wù)和一些對剪切力敏感的高分子(zǐ)物料如:多聚糖和(hé)DNA質粒來驗證該機器的低剪切力能力。

測試物料和(hé)測試手段:

測試離心(xīn)機是由SYCLONE公司提供的STC-5型管式離心機。它是全自動活塞出料,轉鼓(gǔ)容量5.0升,最大旋轉速度17,000轉(20,000g)。對比離心機是CARR SEPARATIONS 提供的P6型(xíng)離心機,容量1.0升,轉速13,300-15,300轉(15,000-20,000g)。大腸杆菌和肺炎鏈(liàn)球菌的發酵液來自(zì)Merck公(gōng)司。純(chún)化(huà)的多聚糖和DNA質粒同樣來自Merck公司。

 

1.細菌和哺乳動物細胞溶液的淨化:                                          為了決定物(wù)料通過量,我們通過不同的(de)進料速率和轉鼓轉速,淨化了大腸杆菌,鏈球菌的發酵液和哺乳動物細胞培(péi)養基流體。通過幾次在不(bú)同流(liú)速下的進料,以及定期澄清液取樣測量濁度,我(wǒ)們(men)確定了物料的穩定態。為了測試我們這種行為相關性的正確性,我們也用P6來淨化大腸杆(gǎn)菌發酵液。

2.剪切力測試:

多聚糖和DNA質粒對於剪(jiǎn)切(qiē)力都是很敏(mǐn)感(gǎn)的,我們(men)都在15,000g的作(zuò)用下(xià)處理。同樣在P6機器(qì)上,導致了多聚糖的破損,而這種23F型多聚糖是一(yī)次進料(1.0Lpm)處理(lǐ)完的。在STC-5機器上,15,000g處理包含可溶解DNA質粒(lì)的大腸杆菌溶液,分5次進料。(4分鍾停滯時間(jiān))。為了回收完整(zhěng)的哺乳細胞,我們先用清水充滿轉鼓,然後再進料,這樣可防止未濕潤的進料區產生突然的剪切(qiē)力。


3.分析技術:

我(wǒ)們用HF公司的DRT-15CE濁度計來測量濁度。為了估計廢液中可溶(róng)性(xìng)生成物的收得率損失,在用刮刀出料後我們對(duì)固料進行稱重和分析,計算出含(hán)液濾。為了驗證剪切力,我(wǒ)們用SSG公司的CASYTTC細胞計數(shù)器(qì),來(lái)測量回收到的固料中可存活的CHO哺乳細胞的數量分布。我們通過監測DNA的釋放量來間接測量細(xì)胞的破損量(用熒光染(rǎn)色(sè)化驗法)。用OlympusAX70顯微鏡來目測10微米大小的哺乳(rǔ)動物細胞(bāo)的分布。我們(men)用激光色譜法測量多聚糖分子的尺寸縮減。使用激光(guāng)折光儀和光度計,通過SDS-PAGE電泳和光密度計來測量(liàng)DNA質粒的破損量(liàng),同時反映了質粒進入疏鬆的(de),敞開的圓盤體和宿主細胞染色體(tǐ)DNA中。

 

4.結果:

產量和淨(jìng)化(huà)效率:

表中的實驗數據表明了離心機轉速和進料速度對淨化效率(lǜ)的影響。

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